La Triyodotironina, una hormona tiroidea, circula en el torrente sanguíneo enlazada a proteínas transportadoras (1,2). La principal proteína de transporte es la globulina enlazada con la tiroxina (TBG). Sin embargo, tan solo la porción libre (sin enlace) de la Triyodotironina se considera como responsable de la acción biológica. Por otra parte, las concentraciones de las proteínas portadoras se alteran en muchas condiciones clínicas, tales como el embarazo. En condiciones normales de funcionamiento de la tiroides, debido a que las concentraciones de proteínas portadoras se alteran, el nivel total de Triyodotironina cambia de tal forma, que permanece constante la concentración de Triyodotironina libre. De esta forma, las mediciones de las concentraciones de Triyodotironina Libre se correlacionan de manera más confiable con el estado clínico que con los niveles totales de Triyodotironina.
Por ejemplo, el incremento de los niveles totales de Triyodotironina asociados con el embarazo, anticonceptivos orales y terapia con estrógenos, hace que los niveles de T3 total se encuentren mas elevados, mientras que la concentración del T3 libre permanece
básicamente sin modificaciones.
El método de inmuno-ensayo enzimático en microplaca, proporciona una técnica con una óptima sensibilidad con bajos requerimientos de
manipulación para la determinación directa del T3 Libre. En este método, el suero de referencia, la muestra del paciente o control es primero adicionada al pozo de la microplaca. El conjugado enzima-T3 (método análogo), se adiciona, y luego los reactivos seguido de una mezcla suave. Una reacción competitiva resulta entre el conjugado enzimático y la Triyodotironina Libre por un número limitado de anticuerpos inmovilizados en el pozo.
Luego de completar el periodo de incubación requerido, el anticuerpo unido conjugado enzima – Triyodotironina Libre es separado del conjugado enzima – Triyodotironina que no formó complejo, por aspiración o decantación. La actividad de la enzima presente en la superficie del pozo se cuantifica mediante reacción con el sustrato adecuado para producir color.
El uso de varias referencias de suero de concentraciones conocidas de Triyodotironina Libre permite la construcción de un grafico de
actividad y concentración. A partir de la comparación con la curva dosis respuesta, se puede correlacionar la actividad de una muestra desconocida con la concentración de Triyodotironina Libre.
