Sensibilidad del 97,5% en pruebas de antígenos COVID-19 en estudio ecuatoriano

Laboratorista realizando hisopado para pruebas de antígeno de COVID-19

Análisis comparativo de la prueba de antígeno COVID-19 de Lansion Biotechnology Co., Ltd.

1. Propósito del análisis

Este análisis tiene como objetivos:

  1. Evaluar el rendimiento clínico del kit de prueba antígeno COVID-19 de la marca Lansionbio, para la determinación del antígeno de la nucleocápside del SARS-CoV-2, en muestras de hisopado nasofaríngeo bajo las condiciones analíticas del laboratorio clínico Corporación Pazmiño Narváez.
  2. Verificar los atributos de validez del kit de prueba de inmunoensayo de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca), como lo son la sensibilidad y especificidad.
  3. Determinar el grado de concordancia entre los resultados obtenidos con el kit de prueba de inmunoensayo de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca) y los obtenidos previamente con metodología de referencia RT-PCR.
  4. Verificar la no existencia de diferencias significativas en términos de concordancia y decisión clínica de los resultados obtenidos entre las metodologías comparadas.

2. Materiales para la evaluación del rendimiento

Reactivo de evaluación
El kit de prueba de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca), que es fabricado por Lansion Biotechnology Co., Ltd. Lote: 0672101

Equipo de inmunofluorescencia seca LS-1100 de la marca Lansionbio.

Reactivo de método de referencial
Ensayo Real Q ™ 2019-nCoV, fabricado por BioSewoom.Inc. Lote 58L-027

Equipo utilizado RIDA®CYCLER BMS MIC, de la casa comercial R-Biopharm AG.

3. Protocolo

Para muestras de hisopado nasofaríngeo, el protocolo a seguir según las indicaciones del fabricante:
40 muestras positivas que han sido diagnosticadas con infección por el virus SARS-CoV-2, se analizaron con el reactivo kit de prueba de antígeno COVID-19 (inmunofluorescencia seca) marca Lansionbio y comparadas con el método de referencia Ensayo Real Q ™ 2019-nCoV (RT-PCR) y 40 muestras negativas fueron probadas con el reactivo kit de prueba de antígeno COVID-19 (inmunofluorescencia seca) marca Lansionbio y comparadas con el método de referencia Ensayo Real Q ™ 2019-nCoV (RT-PCR).

Las 80 muestras obtenidas fueron analizadas mediante el equipo LS-1100 (analizador de inmunofluorescencia seca).

Las 80 muestras que se procesaron siguieron protocolo recomendado por el inserto del fabricante.

Proceso:

Paso 1:
Agregue 8 gotas (= 200 ul) de reactivo de extracción de muestras a la botella de extracción de muestras. Inserte el hisopo en el vial de recolección de muestras lo antes posible, apriételo lentamente 5 veces cerca del fondo del vial de recolección de muestras y luego deje que el líquido penetre en la punta del hisopo de fibra durante 2 segundos para que se disuelva tanto como sea posible en la solución. Retire el líquido del hisopo de algodón. Deseche el hisopo en los desechos de riesgo biológico. Presione la tapa firmemente sobre la botella de extracción que contiene la muestra procesada.

Paso 2:

  1. Preparación. Antes de realizar la prueba, la tira reactiva, la muestra y el diluyente de la muestra deben volver a estar a temperatura ambiente (de 15 °C a 30 °C).
  2. Calibración. Encienda el dispositivo (LS-1100 analizador de inmunofluorescencia) e inserte la curva de calibración escaneando el código QR que viene en cada kit de prueba para completar la calibración.
  3. Agregar muestra. Después de extraer la muestra, agregue inmediatamente 4 gotas (= 100 ul) de la muestra al puerto de muestra de la tira reactiva.
  4. Tiempo de reacción. El tiempo de reacción es de 15 minutos.
  5. Resultado. El resultado se mostrará en la pantalla y se imprimirá automáticamente.
  6. Retire la tira reactiva usada.

4. Criterios de interpretación de resultados

Antígeno COVID-19 < 0.04 indica que la prueba de antígeno es negativa.
Antígeno COVID-19 ≥ 0.04 indica que la prueba de antígeno es positiva.

Si la prueba es positiva, se recomendarán otras pruebas para confirmar el diagnóstico.

5. Resultados

5.1 Resultados de muestras

Gráfico 1

En la gráfica, podemos observar que de las 40 pruebas positivas confirmadas por RT-PCR, obtuvimos mediante la prueba de antígenos 1 falso negativo.

De las 40 pruebas negativas confirmadas por RT-PCR, obtuvimos mediante la prueba de antígeno 3 falsos positivos.

Tabla 1

Interpretación del índice Cohen’s Kappa

Conclusión: Después del análisis kappa de los resultados anteriores, el valor kappa fue 0.9 . Hubo una consistencia sustancial entre el ensayo kit de prueba de antígeno COVID-19 (inmunofluorescencia seca) y Reactivo de método de referencial: Ensayo Real Q ™ 2019-nCoV, fabricado por BioSewoom.Inc

5.2 Recomendaciones de la prueba de antígeno COVID-19 (inmunofluorescencia seca)

El kit de prueba no puede excluir completamente la posibilidad de un falso positivo debido a la especificidad del antígeno y el anticuerpo en la muestra y las diferencias en la estructura compleja de las sustancias biológicamente activas. El resultado de la prueba debe evaluarse en el contexto de todos los datos clínicos y de laboratorio disponibles. En aquellos casos en los que los resultados de laboratorio no concuerden con la evaluación clínica, se deben realizar pruebas adicionales en consecuencia.

5.3 Limitaciones de la prueba de antígeno COVID-19 (inmunofluorescencia seca)
  1. El resultado de este kit es solo una de las ayudas de diagnóstico para los médicos.
  2. Úselo junto con la estrategia de prueba descrita por las autoridades de salud pública en su área.
  3. Los resultados negativos no excluyen la infección por COVID-19 y no deben usarse como la única base para las decisiones de manejo del paciente.
  4. Pueden producirse resultados falsos positivos para el antígeno COVID- 19 debido a la reactividad cruzada de anticuerpos preexistentes u otras causas posibles.
  5. La presencia de anticuerpos específicos es un signo de infección previa o actual, y también se puede utilizar para determinar la eficacia del tratamiento.
  6. Los resultados negativos del paciente con inicio de síntomas antes de siete días, deben ser tratados como presuntos y confirmados con la prueba de ensayo molecular. Si es necesario, debe haber un manejo del paciente. Los resultados negativos no pueden descartar totalmente la infección por SARS-CoV2 y no deben utilizarse como la única base para el tratamiento o las decisiones de manejo del paciente. Los resultados negativos deben considerarse en el contexto de las exposiciones recientes de un paciente, el historial y la presencia de signos y síntomas clínicos compatibles con COVID 19.

6. Discusión

El kit de detección de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca) utiliza el principio de reacción antígeno-anticuerpo. Debido a la acción capilar, la muestra de prueba migrará hacia adelante y luego el antígeno en la muestra se unirá al anticuerpo adherido a las microesferas fluorescentes. El complejo marcado se une al área de detección de anticuerpos inmovilizados, mientras que las otras microesferas fluorescentes se unen al área de control.

Esta reacción nos dará un resultado cuantificado que se interpretará como reactivo (positivo) o no reactivo (negativo) esta interpretación dará una ayuda en la identificación de las etapas tempranas o en la fase aguda de la infección del paciente junto con el examen clínico, la historia clínica del paciente y otros resultados adicionales a la prueba. Y sobre las muestras reactivas altas, el kit de detección de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca) puede dar el informe en 15 minutos, en comparación con el método de prueba RT-PCR.

El kit de detección de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca) se puede utilizar como un indicador de detección rápido y de fácil acceso para la infección por el virus SARS-CoV-2, el único recomendado para el diagnóstico y la exclusión del virus, seguirá siendo el RT-PCR.

En el presente estudio comparativo se analizaron 80 muestras de hisopado nasofaríngeo, los mismos que fueron recolectados en un determinado tiempo, y fueron sometidos a confirmación de sospecha mediante RT-PCR, y se contrarresto contra los resultados de la prueba de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca) como se puede observar en el grafico 1 y la tabla 1 respectivamente, se encontraron un total de 40 muestras positivas confirmadas por RT-PCR , de las cuales 39 fueron detectadas como positivos para COVID-19, la sensibilidad en este caso fue del 97,50 % que el test tiene la capacidad de detectar la enfermedad.

Un total de 40 muestras negativas fueron confirmadas como negativas mediante RT-PCR, para COVID-19, la especificidad en este caso fue del 92,50%, que el test tiene la capacidad para detectar a los pacientes sanos.

La especificidad se vio afectada por la presencia de 3 muestras falsos positivos, 3 pacientes sanos fueron detectados por la prueba de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca), como positivos y confirmada su negatividad mediante RT-PCR, esto puede producirse a la reactividad cruzada de anticuerpos preexistentes u otras causas posibles en el test.

Entre las interferencias químicas que pueden ocasionar un resultado anómalo pueden citarse:

La exactitud de la prueba de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca), esta estimada en un 95% como capaz de clasificar correctamente los pacientes como positivos o negativos.

Finalmente podemos determinar mediante el índice kappa de 0,9 indicándonos que existe una buena concordancia entre las dos pruebas diagnósticas, mientras que el índice de J de Youden (0,9) nos indica la calidad del resultado obtenido de la prueba es excelente siempre que se aproxime a 1.

7. Conclusiones

A través de los métodos definidos en el presente estudio comparativo se demostró mediante la comparación analítica que el método cumple con el propósito para el que fue desarrollado satisfactoriamente.

Podemos concluir adicionalmente que la metodología comparada con el gold estándar para este caso kit de prueba de antígeno COVID-19 (inmunoensayo de fluorescencia seca) de la marca Lansionbio constituye una herramienta valiosa para el diagnóstico preventivo del SARS CoV-2 , en muestras de Hisopado nasofaríngeo, y de esta forma evitar complicaciones crónicas que conllevan a gastos excesivos de tratamientos.

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